Техника лабораторных работ. Медико- биологический Союз. Данный материал взят из книги “Диагностические тест- системы: Радиоиммунный и иммуноферментный методы диагностики” Таранова Анатолия Григорьевича и размещен на сайте с любезного разрешения автора. ГЛАВА IIТЕХНИКА ЛАБОРАТОРНЫХ РАБОТ2.
Условия взятия и хранения биологического материала. Подготовка к проведению лабораторных исследований содержит два основных момента: необходимость соблюдения стандартных условий взятия биологического материала и предотвращение деградации биологически активного вещества в образцах. Перед получением образца крови медицинскому работнику необходимо знать следующее: 1) некоторые биологические вещества, например гормоны, после приема пищи могут иметь повышенную концентрацию; ,2) содержание ряда веществ подвержено влиянию циркадных (суточных) колебаний; 3) множество лекарственных веществ способны влиять на определяемые вещества, повышая или понижая их уровень в крови; 4) взятие исследуемого образца у пациентов в горизонтальном, в вертикальном положении или после физической нагрузки изменяет уровень биологически активных веществ иногда более чем на 1. Желательно, чтобы кровь, предназначенная для исследования, забиралась в однотипные центрифужные пробирки. Такие пробирки должен готовить (мыть, высушивать, добавлять коагулянт или ингибитор ферментов) один сотрудник. Кровь без добавок отстаивают, а с добавками центрифугируют, полученную сыворотку или плазму разливают в такое количество мелких пластмассовых или стеклянных пробирок (стекло не всегда выдерживает низкую температуру), которое равно или превышает число разных типов тестирования. В биохимической деятельности организма большую роль играют биологические ритмы.
- Перед получением образца крови медицинскому работнику необходимо знать следующее: 1) некоторые биологические вещества, например гормоны, после неправильный результат. Несоблюдение температурных и других условий забора крови и хранения образцов.
- Сдать анализ крови на выявление антител по форме 50 ? Получение результатов.
Пульсирующий характер секреции многих веществ от нескольких минут до суток - все это должно быть учтено при взятии биологического материала. Вне связи с временным фактором и конкретным физиологическим состоянием не существует абсолютных нормативных показателей вещества.
Если не преследуется специальная цель исследовать циркадный ритм биологической активности, периферическую венозную или капиллярную кровь у пациентов желательно брать утром натощак в одно и то же время, в условиях физиологического покоя, что особенно важно при исследовании веществ, секреция и метаболизм которых протекает в течение суток неодинаково. Во время процедуры взятия крови следует избегать гемолиза, который некоторым возможен при длительном венозном застое, энергичной аспирации крови шприцем, попадании в просвет иглы воды и детергентов, действии на кровь высокой и низкой температур. Получение сыворотки или плазмы крови. Цельная кровь (капиллярная и венозная) используется в основном в биохимических исследованиях (определение глюкозы, показателей КЩР, определение концентрации электролитов в эритроцитах) и гематологии (исследование LE- клеток, гематокрита, на малярию, проведение стандартного клинического анализа крови).
Исследование крови на сифилис. Карта учета лекартственных средств гражданина, имеющего право на получение набора социальных услуг. Справка по результатам освидетельствования.
Для радиоиммуиных и иммуноферментных методов получают сыворотку или плазму. Вопрос о том, что лучше брать для анализа - плазму или сыворотку - не имеет однозначного ответа. Некоторые исследователи предпочитают сыворотку, так как стероиды, например, из нее экстрагируются легче и полнее, чем из плазмы. Кроме того, плазма нередко образует эмульсию с органическими растворителями во время экстракции, а после замораживания и оттаивания в ней появляются хлопья фибрина, мешающие определению. Для биохимических исследований чаще используется сыворотка венозной крови, полученной у пациента при определенных условиях.
При выборе вида материала следует учитывать следующее: 1) При получении сыворотки крови возникает опасность того, что при отстаивании крови из эритроцитов интенсивно освобождаются протеолитические ферменты, которые могут разрушить определяемое вещество и повредить его меченый аналог во время инкубирования. Поэтому для определения содержания белковых соединений предпочтительно готовить плазму крови. При получении плазмы часто используют гепарин или цитрат. Первый блокирует связывание антитела с антигеном, второй существенно изменяет кислотность среды, к которой чрезвычайно чувствительны некоторые вещества. Поэтому в сухую центрифужную пробирку желательно насыпать 5. ЭДТА на 5 мл крови (1: 1. Сразу же после забора кровь перемешать с ЭДТА и отцентрифугировать.
ЭДТА является слабым антикоагулянтом, блокатором протеолитических ферментов и составной частью многих буферных смесей. Обработка крови для лабораторных исследований. Полученная и доставленная в лабораторию кровь должна быть быстро обработана, или подвергнута исследованию. Длительное стояние сыворотки над эритроцитами может привести к сдвигам концентраций составляющих, поэтому время стояния сыворотки над сгустком должно быть ограничено. Кроме того, биологический полураспад некоторых исследуемых веществ настолько мал, что стояние сыворотки при высокой комнатной температуре может полностью исказить полученные результаты исследования.
В начале обработки чистой сухой стеклянной палочкой сгусток крови осторожно отделяется от стенок пробирки, пробирка взвешивается и подготавливается к центрифугированию. Подавляющее количество лабораторных образцов для исследований рекомендуется центрифугировать при +4 . Высокая скорость вращения, как правило, приводит к гемолизу сыворотки или плазмы. Полученную сыворотку (плазму) необходимо быстро отделить от форменных элементов крови и плотно закрыть пробирки крышкой. Если получена липемическая или гемолизированная сыворотка, образец, как правило, выбрасывается. Хранение крови (плазмы, сыворотки)Для определения большинства биологического материала считается возможным хранение его при комнатной температуре не более 6- 8 часов.
Некоторые образцы разрешается хранить в течение недели при + 4. При необходимости хранения сыворотки (плазмы) более суток, образец рекомендуется замораживать при - 2. При работе с кровью общим правилом должно являться немедленное отделение плазмы или сыворотки от форменных элементов, так как некоторые вещества могут поглощаться и инактивироваться эритроцитами и лейкоцитами.
Показатели общего анализа крови имеют большое значение для. Расширенный гематологический анализ крови позволит получить максимально. Общий анализ крови у взрослых позволяет оценить состояние здоровья при различных. Но как расшифровать цифры на бланке? Общий анализ крови у взрослых людей: норма показателей и расшифровка результатов. Это позволит получить точный результат без погрешностей и . Общий анализ крови (ОАК) представляет собой рутинное лабораторное. Как правило, результаты исследования заносятся в специальный бланк. Никому не хочется получить недостоверные результаты, в связи с этим на . Для того, чтобы получить результат автоматически, Вам необходимо заполнить бланк-заявку на получение результата по электронной почте при сдаче .
Но даже в простых водных растворах они спонтанно окисляются (например, кортизол превращается в 2. Большинство веществ биологического происхождения при низкой температуре более стабильны, чем при комнатной, поэтому их обычно хранят в замороженном состоянии. В пробах крови после ее взятия происходит огромное количество процессов.
Быстро размножающиеся бактерии и ферментативный гидролиз могут кардинально изменять состояние и содержание всех компонентов. Наиболее эффективным средством замедления и предотвращения таких изменений являются замораживание и быстрое центрифугирование. Однако, даже при –2.
Естественным следствием этого является снижение концентрации веществ при длительном хранении при - 4. На примере АКТГ видно, что температурный режим и физико- химические параметры среды имеют решающее значение для сохранности вещества. При хранении АКТГ в течение 1. Но кортикотропная активность кислого экстракта аденогипофиза, полученного гомогенизацией ткани в 0,1 % соляной кислоте, сохраняется при 2.
При таких условиях образцы пригодны для анализа в течение нескольких месяцев, иногда до года. При повторном замораживании и оттаивании происходит частичная деградация белковых веществ (соединений), в то время как для веществ с малым молекулярным весом (например, стероидные гормоны) эти процедуры не столь опасны.
Образцы крови необходимо хранить в хорошо закрытых пробирках, так как потеря в образце влаги в замороженном состоянии может привести к концентрированию исследуемого вещества и получению в итоге ошибочного результата. По экономическим соображениям важно до госпитализации и до любых терапевтических вмешательств взять образцы плазмы или сыворотки и поместить их в банк сывороток. После установления диагноза, если нет нужды в исследовании биологического материала, и образец не нужен для исследований, он может быть изъят из банка сывороток или плазм, однако, в наличия патологического процесса (особенно опухоли) возможно повторное определение уровня исследуемых веществ или их комбинаций.
Кроме того, исследуемый образец рекомендуется оставлять в банке сывороток с тем, чтобы при модификации наборов фирмой- поставщиком, можно было корректно продолжить мониторинг больного. Этот подход также может оказаться полезным, если появится новый маркер, отличающийся более высокой чувствительностью и специфичностью. При медленном замораживании образуются кристаллы льда, которые разрывают молекулы, особенно белковые, поэтому для оптимальной стабильности вещества необходимо быстрое замораживание. Лучше всего замораживание проводить с самого начала в жидком азоте - в этой среде процесс замораживания идет намного быстрее и не сопровождается разрушением охлаждаемых веществ. Нет общих правил относительно размораживания, однако эксперименты показывают, что следует избегать теплового шока образцов. Размораживание следует производить медленно и постепенно.
Некорректно переносить образец сразу же из –2. Важно избегать повторного замораживания образца, лучше предварительно разделить его на несколько пробирок, чтобы не было проблем в случае повтора анализа. Размораживание и повторное замораживание повреждает практически все биологические пробы.
Существует ошибочное мнение о том, что такое воздействие не влияет на тиреоидные и стероидные гормоны. Действительно, структура молекул этих гормонов лучше сохраняется в таких ситуациях. Однако следует помнить, что основной пул стероидных и тиреоидных гормонов циркулирует под “защитой” транспортных белков, которые, как и все другие белки, не выдерживают температурных перепадов и, разрушаясь, перестают “защищать” гормоны. Последние, освобождаясь, немедленно включаются в метаболическую цепь, что, в конечном итоге, ведет к искажению истинной картины.
Химическое окружение, в котором находится препарат, также является важным фактором. При хранении белков в растворах концентрация этих белков всегда должна быть больше 1 мг/мл. Известно, например, что разбавленная антисыворотка теряет активность намного быстрее, чем неразбавленная.